Bst 4.0 Basic Mix (液體預(yù)混)

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
Bst 4.0 Basic Mix (液體預(yù)混)	100Tx20μl	BJ-PJ6565

商品介紹：

描述：

該制品為單一組分的 MasterMix（2 倍濃度），包含了反應(yīng)緩沖液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等，使用時只需要加入引物、模板即可進行核酸恒溫擴增。Bst4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性（逆轉(zhuǎn)錄），還具有依賴于 DNA 的聚合酶活性，因此無論DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進行高效的恒溫擴增。該制品是進行 LAMP 及 RT-LAMP 擴增反應(yīng)的絕佳試劑。優(yōu)化的反應(yīng)體系，確保快速的完成檢測試劑的反應(yīng)體系建立。該系列產(chǎn)品不包含任何其它輔助染料，在 LAMP 的擴增搭配 OG 橙綠變色管進行可視化變色反應(yīng)。除此外，該制品還可以用于其它恒溫擴增實驗，包括 CPA、SMAP 等。
儲存：長期保存制品于-20℃，保存 2 年。
使用實例（以 LAMP OG 橙綠變色為例）橙綠變色染料（OG Dye）以凍干的形式預(yù)加在 8 聯(lián)管蓋上。在 LAMP 反應(yīng)完畢后（在反應(yīng)完畢前，務(wù)
必不能將管蓋上染料混入反應(yīng)液中），將 0.2ml EP 管顛倒溶解 OG 染料后。LAMP 的反應(yīng)產(chǎn)物將與 OG 染料形成強烈的綠色肉眼可見變色反應(yīng)（陽性），而未發(fā)生擴增的 EP管為深橙色（陰性）。
（1）配制反應(yīng)體系
在 0.2ml EP 反應(yīng)管中加入下述試劑
2xBst 4.0 Basic Mix 10 μl
*10xLAMP Primer Mix 2 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 20 μl
*10xLAMP Primer Mix 濃度：FIP/BIP 分別為 16 μM、LoopF/B 分別為 4 μM、F3/B3 分別為 2 μM全部試劑加入完畢后，輕彈 EP 管底部后，再蓋上 OG 橙綠變色管（蓋上管蓋后務(wù)必不能再劇烈混合與倒置，以防止將管蓋上的 OG 染料溶解，OG 染料一旦混入反應(yīng)液中將會終止 LAMP 反應(yīng)）。
首次實驗 LAMP Primer Mix 分別采用 1、1.5、2 μl，以陰性不變色，陽性樣品正常變色為標準，作為后續(xù)測試用量。
（2）反應(yīng)體系配好后，置于 60~68°C（首次實驗采用65°C）進行反應(yīng) 20~45min。（擴增良好的引物組合，通常 25min 即可變色，一般不超過 45min，首次實驗設(shè)置20、25、30、45min）。
（3）觀察結(jié)果：觀察結(jié)果時，盡可能不要與配制反應(yīng)空間共用，以防止污染操作臺。將反應(yīng) EP 管倒置，并手腕輕甩，反應(yīng)液浸泡 EP 管蓋上的 OG 染料，靜置 30s。再將 EP 反應(yīng)管正置，并輕甩反應(yīng)液到 EP 管底部，此時擴增樣品將變?yōu)轷r艷肉眼可見綠色，而陰性未發(fā)生擴增的管將為深橙色。
注意事項
1. 在用于其它恒溫擴增反應(yīng)時（如 CPA、SMAP 等），可參考如上策略進行使用，反應(yīng)時間可能會需要調(diào)整。
2. 關(guān)于礦物油的使用，在配制完 LAMP 反應(yīng)體系后，可加入一滴礦物油覆蓋于反應(yīng)液上部，以減少氣溶膠的污染。
3. 鑒于特殊的生產(chǎn)工藝， 全系恒溫擴增 Mix 系
列均不能進行濁度分析。