pBM40 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆載體 真核表達）

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產品名稱	規格	貨號
pBM40 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆載體 真核表達）	20 次	BJ-PJ6531

商品介紹：

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產品介紹：
利用痘苗病毒的拓撲異構酶I(Topoisomerase I)的切割再連接的特點將PCR產物定向克隆到線性化的pBM40哺乳動物表達載體中。適用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶擴增的平末端PCR產物。引物CMVforward和SV40PolyArev可用于菌落PCR和測序鑒定。
產品特點：
（1）連接反應僅需 5 分鐘。
（2）只適合平末端 PCR 產物的快速、高效、定向克隆。
（3）載體采用了新的制備工藝，零背景，無需藍白斑篩選。
（4）具有 CMV 啟動子，適用于外源基因在哺乳動物細胞中的表達，帶新霉素抗性基因，便于穩轉細胞株的篩選。C 端帶 FLAG 標簽序列便于表達的目的蛋白質的檢測。
（5）相對于 pcDNA3.1 等其它哺乳動物表達載體，pBM40載體具有更小的質粒骨架，轉染效率高。
（6）載體具有卡那霉素和新霉素抗性。
注意事項：
（1）引物要求：PCR 引物 5’端不能進行磷酸修飾，普通商業化引物即可。上游引物的 5’端添加 CACC 四個堿基（CACC 為真核表達所必需的 Kozak 序列）。如果目的蛋白需要在 C 端帶 FLAG 標簽，下游引物則需要去掉基因本身的終止密碼子（3 個堿基），目的蛋白的翻譯終止由 FLAG 標簽的終止密碼子 TAA（位于 Xho I 酶切位點前）來實現。
（2）DNA 聚合酶：選用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 擴增。
（3）連接時間：5-15 分鐘，通常用 15 分鐘。
（4）連接溫度：室溫 (22℃-30℃)，可使用 PCR 儀控溫。最佳反應溫度為 25℃。若片段存在高 GC 等復雜結構，可在 37℃反應。