商品描述:
商品屬性
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產(chǎn)品名稱
煙曲霉基因組DNA
英文名稱
Genomic DNA from Aspergillus fumigatus
規(guī)格
5μg/支
貨號(hào)
BJ-J2906
商品詳情
培養(yǎng)基
麥芽浸粉:130.0,氯霉素:0.1,瓊脂:15.0,pH:6.0±0.2(25℃)
傳代方法
使用前請(qǐng)先在去蛋白液RD和漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶上標(biāo)簽; 1.取新鮮菌絲加入液氮充分研磨; 2.向研磨好的粉末中迅速加入400μL緩沖液GPS和10μL RNase A(10mg/mL),迅速渦旋混勻后,將離心管放在65℃水浴15min,水浴過(guò)程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。注意:若裂解后溶液粘稠,可以適量加大GPS使用量,同時(shí)在步驟3中增加緩沖液GPA的使用量,最終GPS和GPA的體積比為4:1; 3.加入100μL緩沖液GPA,渦旋振蕩1min,12,000rpm(13,400×g)離心5min,轉(zhuǎn)移上清至過(guò)濾柱CS中(過(guò)濾柱CS放在收集管中),然后12,000rpm(13,400×g)離心1min,轉(zhuǎn)移濾液至新的離心管中。注意:若裂解后溶液粘稠,加入緩沖液GPA渦旋混勻后將離心管置于冰上靜置5min,然后再離心; 4.加入等體積的無(wú)水乙醇,充分混勻,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀; 5.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都轉(zhuǎn)移到RNase-Free吸附柱CR2中(吸附柱CR2放在收集管中),12,000rpm(13,400×g)離心1min,倒掉廢液,RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中; 6.向RNase-Free吸附柱CR2中加入550μL去蛋白液RD(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000rpm(13,400×g)離心1min,倒掉廢液,將RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中; 7.向RNase-Free吸附柱CR2中加入700μL漂洗液PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000rpm(13,400×g)離心1min,倒掉廢液,將RNase-Free吸附柱CR2放入收集管中; 8.重復(fù)步驟7; 9.將RNase-Free吸附柱CR2放回收集管中,12,000rpm(13,400×g)離心2min,棄收集管,然后將RNase-Free吸附柱CR2轉(zhuǎn)移到新的離心管中,室溫晾干5-10min。注意:乙醇?xì)埩魰?huì)抑制后續(xù)的酶反應(yīng),所以晾干時(shí)要確保乙醇揮發(fā)干凈。但也不要干燥太長(zhǎng)時(shí)間,以免難以洗脫DNA; 10.在RNase-Free吸附柱CR2中加入50-100μL洗脫緩沖液TB,室溫放置3-5min,12,000rpm(13,400×g)離心2min,將溶液收集到離心管中;
生長(zhǎng)條件
28-30℃,好氧
存儲(chǔ)條件
2-8℃
安全等級(jí)
1
共享方式
公益性共享