常見的RNA酶抑制劑介紹

    RNA酶抑制劑具有廣譜的RNA酶抑制作用，包括中性的真核生物的RNA的抑制作用。分子量是50kDa的蛋白質(zhì)通過非共價鍵與RNA酶以1：1的比例結(jié)合發(fā)揮它的抑制作用。RNA酶抑制劑與RNA酶結(jié)合的有效濃度時10-14M。而且，RNA酶抑制劑的動力學(xué)結(jié)合是非常迅速的，確保與RNA酶的迅速絡(luò)合，并對其產(chǎn)生迅速的抑制作用。下面介紹３種廣泛應(yīng)用的特異性RNA酶抑制劑。

1、RNA酶的蛋白質(zhì)抑制劑是 從人胎盤分離的一種蛋白質(zhì)可與多種RNA酶緊密結(jié)合（KI≈3x1010）形成非共價結(jié)合的等摩爾復(fù)合物，使RNA酶失活。此蛋白質(zhì)體內(nèi)可能是血管生成素的抑制劑，血管生成素是氨基酸序列和推測的三級結(jié)構(gòu)與胰RNA酶類似的一種血管生成因子， 幾個廠家以不同的商品名出售這種抑制劑，該蛋白質(zhì)應(yīng)置于含5mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）的50％甘油中，貯存于－20℃。抑制劑制品凍融數(shù)次后或放置在氧化條件下即應(yīng)棄之不用，因為上述處理會使蛋白質(zhì)變性從而釋放出所結(jié)合的RNA酶。因此，在使用變性劑裂解哺乳動物細胞這一提取RNA的初始步聚中不應(yīng)使用這種蛋白抑制劑。然而職用更溫和的裂解方法時應(yīng)使用這種抑制劑，并且在后續(xù)的所有RNA純化步驟中均應(yīng)有此蛋白質(zhì)存在。由于酚抽提可以除蛋白質(zhì)抑制劑，故應(yīng)在純化過程中補加幾次抑制劑。其最大活性的發(fā)揮要求巰基試劑，而且它并不干擾反轉(zhuǎn)錄或mRNA在無細胞體系中的翻譯。

2、氧釩核糖核苷復(fù)合物  這種由氧釩（1V）離子和4種核糖核苷之中的任意一種所形成的復(fù)合物，是量種過渡態(tài)類似物，它能與多種RNA酶結(jié)合并幾科能百分之百地抑制RNA酶的活性。這４種氧釩核糖核苷復(fù)合物可加入完整細胞中，在RNA提取和純化的所有過程中，其使用濃度都是10mmol/L。所得到的mRNA可直接在硅卵母細胞中進行翻譯， 并能作為某些外酶促反應(yīng)（如mRNA反轉(zhuǎn)錄）的模板。然而氧釩核糖核苷復(fù)合物強烈抑制mRNA在無細胞體系中的翻譯，因此必須用含0.1 ％羥基喹淋的苯酚[ 用0. 01mol/LTris.Cl(pH7.8)平衡]多次抽提以去除之。有幾家公司出售氧釩核糖核苷復(fù)合物。
3、Macaloid（硅藻上）Macaloid是一咱粘土，很多年前就發(fā)現(xiàn)它能吸附RNA酶，用緩沖液將其制成漿液，以0.015％（W/V）的終濃度溶解細胞。 這種粘土隨同它所吸附的RNA酶可在后續(xù)的RNA純化過程中（如酚抽提后）經(jīng)離心去除。